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【飛諾美色譜】色譜小知識丨什么是柱外體積?

更新時間:2024-12-02點擊次數(shù):169

柱外體積是液相色譜中死體積重要的組成部分,它包括進(jìn)樣器體積,混合器體積,色譜柱前后連接管路的體積,連接配件等所產(chǎn)生的空間,以及檢測器流通池體積。根據(jù)您使用的系統(tǒng)和應(yīng)用,在HPLC上開發(fā)超高性能方法需要優(yōu)化上述配件以減少柱外體積。


測量柱外體積的方法


等度法

等度方法的系統(tǒng)體積測量相當(dāng)簡單,可以直接在系統(tǒng)上進(jìn)行,而無需更改流動相。首先,取出HPLC色譜柱并用零死體積兩通替換色譜柱。然后以固定流速啟動HPLC,并在系統(tǒng)中注入少量丙酮或其他有UV吸收組分,并在270nm或220nm處進(jìn)行監(jiān)測。從丙酮進(jìn)樣到色譜圖中開始出峰的時間表明了系統(tǒng)的柱外體積。計算方法如下:





調(diào)整進(jìn)樣器和色譜柱入口之間的流路以及柱后流路可以減小該體積。


梯度法

雖然梯度法的柱外體積測量并不像等度法那么簡單,但它操作起來也并不復(fù)雜。首先,取出HPLC色譜柱并用零死體積兩通替換色譜柱。一個流動相是水,另一相是乙腈,并在流動相B中添加一定量的丙酮,此時需要切換流動相,并在適當(dāng)?shù)牟ㄩL下監(jiān)測紫外線以檢測丙酮(220nm或270nm都可以)。梯度法即系統(tǒng)保持在100%A(1-2分鐘),然后在幾分鐘內(nèi)從0%至100%B梯度。從梯度開始時間到UV信號基線上升的時間延遲即為總的系統(tǒng)體積。計算也很簡單:





梯度法柱外體積測試方法作為優(yōu)化HPLC系統(tǒng)的重要工具,以更好的配合核殼填料(Kinetex)的柱效優(yōu)勢。在柱外體積測試期間,也可以交替使用進(jìn)樣器旁路與主路,以查看進(jìn)樣器回路對整個HPLC系統(tǒng)死體積的影響。



TEL:13731181310

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